产品货号:
KFS127
中文名称:
高尔基体绿色荧光探针
英文名称:
GolgiGreen
产品规格:
200μL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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高尔基体绿色荧光探针GolgiGreen可以用来研究神经鞘脂类的运输和代谢机制,也可以用来作为活细胞或固定细胞内高尔基体的选择性染料。NBD染料对于环境敏感,在水中荧光信号微弱,但是在非质子溶剂和非极性环境中荧光增强。
中文名称:NBD C6-神经酰胺
英文名称:NBD C6-ceramide
分子式:C30H49N5O6
分子量:575.74
光谱特性:Ex/Em=466/536nm
组分 | 规格 |
高尔基体绿色荧光探针GolgiGreen | 200μL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,避光,有效期一年。
- GolgiGreen-BSA复合物制备
活细胞和固定细胞染色,建议使用以BSA复合物形式存在的GolgiGreen。制备方法如下:- 吸取50μL的GolgiGreen储液至小玻璃试管中,保持干燥,通入氮气流后,保持在真空放置至少1小时。再以200μL的无水乙醇重溶。
- 称取10mL无血清的平衡盐溶液如,Hank's液+10mM HEPES,pH7.4(HBSS/HEPES)到50mL塑料离心管中,加入3.4mg (使之浓度为0.34mg/mL)的脱脂BSA。
- 涡旋混匀含有10mL的BSA溶液的试管,注入200μL的GolgiGreen乙醇溶液。涡旋震荡。所得到的的溶液(5μM GolgiGreen + 5μM BSA)可以于-20℃保存。
- 吸取50μL的GolgiGreen储液至小玻璃试管中,保持干燥,通入氮气流后,保持在真空放置至少1小时。再以200μL的无水乙醇重溶。
- 活细胞高尔基复合体染色
- 用合适的缓冲液如HBSS/HEPES冲洗盖玻片上的细胞。
- 5μM GolgiGreen + 5μM BSA孵育细胞,4℃,30分钟。
- 预冷的新鲜培养基多次冲洗样品细胞,在放于37℃另外孵育30分钟。
- 新鲜培养基洗涤样品,用荧光显微镜观察。
- 用合适的缓冲液如HBSS/HEPES冲洗盖玻片上的细胞。
- 固定细胞的高尔基复合体染色
染色条件同上一致,但洗涤剂和含甲醇/丙酮类的固定剂必须加以避免。- HBSS/HEPES冲洗盖玻片上生长的细胞,用0.5%戊二醛/10%的蔗糖/100mM的PIPES,pH7.0或者2~4%多聚甲醛/PBS室温固定5~10分钟。
- 以预冷的HBSS/HEPES多次洗涤样本,用5μM GolgiGreen-BSA复合物在4℃下冰浴孵育30分钟。
- HBSS/HEPES冲洗,以10% FBS或者2mg/mL的BSA在室温下孵育30~90分钟,以提高高尔基体染色。
- 样品洗净,装入并通过荧光显微镜观察。
- HBSS/HEPES冲洗盖玻片上生长的细胞,用0.5%戊二醛/10%的蔗糖/100mM的PIPES,pH7.0或者2~4%多聚甲醛/PBS室温固定5~10分钟。
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